Serwisy internetowe Uniwersytetu Warszawskiego Nie jesteś zalogowany | zaloguj się


Izolacja DNA ze śliny zmodyfikowaną metodą wysalania

Witamy na wiki Wydziału Biologii Uniwersytetu Warszawskiego

Spis treści

Zastosowanie

Protokół opisuje izolowanie DNA ze śliny (nie z wymazu!).

Przepis

Wersja dla próbek śliny 5 ml

Podpisać probówki, przygotować miskę z lodem.

  1. Ślinę przelać do probówki, dodać 5 ml buforu lizującego.
  2. Dodać 150 µl proteinazy K (20 mg/ml) oraz 750 µl 10% SDS. Inkubować przez noc w 53 oC wytrząsając.
  3. Dodać 2 ml 5M NaCl. Inkubować 10min na lodzie.
  4. Zwirować (13000 rpm, 10 min).
  5. Przelać supernatant do nowej probówki. Dodać 4 ml izopropanolu. Inkubować 10 min w temperaturze pokojowej.
  6. Zwirować (13000 rpm, 15 min).
  7. Zlać supernatant. Przemyć 2,5 ml 70% etanolem.
  8. Pelet wysuszyć, zawiesić w 150 µl wody podwójnie destylowanej.

Wersja dla próbek śliny 1 ml

  1. Ślinę przelać do probówki, dodać 1 ml buforu lizującego.
  2. Dodać 15 µl proteinazy K (20 mg/ml) oraz 75 µl 10% SDS. Inkubować przez noc w 53 oC wytrząsając.
  3. Dodać 200 µl 5M NaCl. Inkubować 10min na lodzie.
  4. Zwirować (13000 rpm, 10 min).
  5. Przelać supernatant do nowej probówki. Dodać 400 µl izopropanolu. Inkubować 10 min w temperaturze pokojowej.
  6. Zwirować (13000 rpm, 15 min).
  7. Zlać supernatant. Przemyć 250 µl 70% etanolem.
  8. Pelet wysuszyć, zawiesić w 15 µl wody podwójnie destylowanej.

Bufor lizujący

  • 50 mM Tris pH 8.0
  • 50 mM EDTA
  • 50 mM sacharozy
  • 100 mM NaCl
  • 1% SDS

Uwagi

Nie oczekujcie, że wyizolujecie dużo DNA :-). Protokół zaczerpnięty z artykułu (tutaj będzie link).

Protokół nie jest aktualnie stosowany w żadnym z instytutów ani zakładów Wydziału Biologii.

osobiste